在部分實驗室,由于血清和培養(yǎng)條件等差異,轉(zhuǎn)染后鏡下培養(yǎng)基中可能出現(xiàn)少量黑點狀沉淀,為轉(zhuǎn)染試劑和血清中蛋白結(jié)合產(chǎn)物,不影響轉(zhuǎn)染結(jié)果和細胞狀態(tài),可通過換液除去。
無血清培養(yǎng)基,顧名思義,就是在細胞培養(yǎng)中不需要添加血清,但是在某些應(yīng)用中可能要添加生長因子或細胞因子。無血清培養(yǎng)基中添加了血清的主要成分:粘附因子、生長因子、必需的營養(yǎng)物質(zhì)和激素等,能減少血清帶來的不利因素,使細胞培養(yǎng)的條件更穩(wěn)定。經(jīng)歷了天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基后,無血清培養(yǎng)基和無血清培養(yǎng)成為當今細胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一大趨勢。采用無血清培養(yǎng)可簡化純化和鑒定各種細胞產(chǎn)物的程序,避免病毒污染造成的危害。
常用的有PDA培養(yǎng)基、孟加拉紅培養(yǎng)基、高鹽察氏培養(yǎng)基、酵母粉葡萄糖氯霉素瓊脂等等。培養(yǎng)7天后如果菌落長毛的就是霉菌,沒有毛的就是酵母菌,形態(tài)可能會不一樣,因為酵母菌不止一種,不同的酵母菌長出來的形態(tài)會不一樣。
泛素化是指泛素分子在一系列酶的作用下共價結(jié)合到靶蛋白上的過程。這個過程涉及三種關(guān)鍵酶:E1泛素激活酶、E2泛素結(jié)合酶和E3泛素連接酶。首先,E1在ATP供能下激活泛素分子,然后將其轉(zhuǎn)移到E2上,最后E3識別并結(jié)合特定的底物蛋白,催化泛素從E2轉(zhuǎn)移到底物蛋白的賴氨酸殘基上,形成異肽鍵,完成泛素化修飾。
將血清脂蛋白用脂類染料(如蘇丹黑或油紅O等)進行預(yù)染。再將預(yù)染過的血清置于瓊脂糖凝膠板上進行電泳分離。通電后,脂蛋白向正極移動,并分離為幾個區(qū)帶。