固定劑與甲醛不同,戊二醛的這一步反應是不可逆的,而且需要氧氣的參與。由于大塊的樣品內(nèi)部氧氣供應不足,戊二醛在大塊樣品的內(nèi)部無法形成穩(wěn)定的生成物,會導致樣品內(nèi)部的固定效果不佳。因而在使用戊二醛固定時,小塊的樣品固定效果較為理想。戊二醛通過交聯(lián)作用固定蛋白質(zhì)的過程會伴隨氫離子的釋放,使樣品pH值降低。為了維持pH值穩(wěn)定在最佳水平,在戊二醛的固定劑中要加入足量的緩沖液。
鐵染色原理:人體內(nèi)有一定量的以鐵蛋白和含鐵血黃素形式貯存的鐵元素,這些鐵在酸化的低鐵氰化鉀溶液中反應,生成藍色的亞鐵氰化鐵沉淀(普魯士藍),定位于含鐵的部位。
酶固定化后一般穩(wěn)定性增加,易從反應系統(tǒng)中分離,且易于控制,能反復多次使用。便于運輸和貯存,有利于自動化生產(chǎn),但是活性降低,使用范圍減小,技術(shù)還有發(fā)展空間。固定化酶是近十余年發(fā)展起來的酶應用技術(shù),在工業(yè)生產(chǎn)、化學分析和醫(yī)藥等方面有誘人的應用前景。
細胞分裂素的主要作用是促進細胞分裂。細胞分裂素不僅能促進細胞分裂,也可以使細胞體積擴大。但和生長素不同的是,細胞分裂素是通過細胞橫向擴大增粗,而不是促進細胞縱向伸長來增大細胞體積的,它對細胞的伸長有一定的抑制效應。
胎牛血清是細胞培養(yǎng)中最常用的血清類型之一。它來源于胎牛,富含多種營養(yǎng)成分和生長因子,能夠為細胞提供全面的生長支持。胎牛血清由于未接觸外界環(huán)境,抗體和補體含量低,對細胞的潛在毒性小,因此廣泛應用于各種細胞培養(yǎng),尤其是對培養(yǎng)環(huán)境要求較高的細胞類型,如干細胞、淋巴細胞和神經(jīng)細胞等。
滅菌的徹底性是培養(yǎng)基滅菌工程的首要要求。必須確保培養(yǎng)基中的細菌、病毒、真菌等微生物被完全殺滅,以避免微生物對實驗或生產(chǎn)造成污染。為實現(xiàn)這一目標,需要嚴格控制滅菌過程中的溫度、壓力和時間等參數(shù),確保滅菌效果達到標準。
反轉(zhuǎn)錄酶主要用于體外cDNA的合成。目前最常用的反轉(zhuǎn)錄酶(reverse transcriptase)有SuperscriptII、M-MLV和AMV等。它們具有依賴于RNA或DNA的DNA聚合酶活性和RNaseH酶活性,可以以RNA分子為模板,合成出一條DNA鏈。形成的DNA是與RNA模板互補的,因而反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA分子稱之為cDNA。