滅菌的徹底性是培養(yǎng)基滅菌工程的首要要求。必須確保培養(yǎng)基中的細(xì)菌、病毒、真菌等微生物被完全殺滅,以避免微生物對(duì)實(shí)驗(yàn)或生產(chǎn)造成污染。為實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo),需要嚴(yán)格控制滅菌過(guò)程中的溫度、壓力和時(shí)間等參數(shù),確保滅菌效果達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。
反轉(zhuǎn)錄酶主要用于體外cDNA的合成。目前最常用的反轉(zhuǎn)錄酶(reverse transcriptase)有SuperscriptII、M-MLV和AMV等。它們具有依賴于RNA或DNA的DNA聚合酶活性和RNaseH酶活性,可以以RNA分子為模板,合成出一條DNA鏈。形成的DNA是與RNA模板互補(bǔ)的,因而反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的DNA分子稱之為cDNA。
在選擇試劑瓶時(shí),需要綜合考慮試劑的性質(zhì)、純度要求、狀態(tài)、保存期限以及安全性等因素,以確保試劑的質(zhì)量和使用安全。
藥物的分離純化是從合成或天然來(lái)源中獲得的藥物混合物中,將目標(biāo)化合物純化為高純度的過(guò)程。這是藥物研發(fā)和制造過(guò)程中非常重要的步驟,因?yàn)楦呒兌鹊乃幬锎_保了其安全性和有效性。
Western Blot顯色的方法主要有以下幾種: i. 放射自顯影 ii. 底物化學(xué)發(fā)光ECL iii. 底物熒光ECF iv. 底物DAB呈色 現(xiàn)常用的有底物化學(xué)發(fā)光ECL和底物DAB呈色,體同水平和實(shí)驗(yàn)條件的是用第一種方法,目前發(fā)表文章通常是用底物化學(xué)發(fā)光ECL。只要買現(xiàn)成的試劑盒就行,操作也比較簡(jiǎn)單,原理如下(二抗用HRP標(biāo)記):反應(yīng)底物為過(guò)氧化物+魯米諾,如遇到HRP,即發(fā)光,可使膠片曝光,就可洗出條帶。
支持物是人工合成的交聯(lián)高聚物,在水中膨脹后成為凝膠。凝膠內(nèi)為內(nèi)水層,凝膠周圍的水為外水層。控制交聯(lián)度以形成不同孔徑的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。交聯(lián)度小的孔徑大,交聯(lián)度大的孔徑小。
操作應(yīng)當(dāng)在超凈工作臺(tái)或經(jīng)過(guò)消毒處理的無(wú)菌室進(jìn)行。瓊脂平板在工作臺(tái)暴露15分鐘,每個(gè)平板不得超過(guò)15個(gè)菌落。
細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu),如鞭毛、莢膜、細(xì)胞壁、芽孢及異染顆粒等,用普通染色法不易著色,故需用特殊染色法。
硝酸銀是一種腐蝕性強(qiáng)的化學(xué)試劑,在操作過(guò)程中應(yīng)戴上防護(hù)手套和護(hù)目鏡等防護(hù)裝備,以避免對(duì)人體造成傷害。